大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Bcl-2,Bax的表达及其意义
核心提示:
摘要 目的:建立大鼠实验性牙髓炎模型;原位观察大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Bcl-2和Bax的表达情况,探讨两者在牙髓炎病理变化中的作用。方法:利用 SD大鼠的下颌第一磨牙采用内毒素化学诱导法建立牙髓炎模型,用免疫组织化学染色的方法研究Bcl-2和Bax的表达及其意义。结果: 正常牙髓中Bcl-2在成牙本质细胞层表达阳性,牙髓中央区域弱阳性, Bax在成牙本质细胞层表达强阳性,牙髓中央区域阳性。在牙髓中央的表达弱于牙髓外周,Bcl-2的表达在相应部位弱于Bax。在炎症牙髓中炎细胞浸润区Bcl-2表达强阳性,纤维包饶区和充血反应区表达分别为阳性和弱阳性, Bax在炎症牙髓中着色较均匀。结论:成牙本质细胞凋亡与Bcl-2和Bax的表达量有关,正常牙髓中存在细胞凋亡,这与该部位Bax表达量较高有关;Bcl-2和Bax是牙髓炎时炎细胞凋亡的重要调控因素之一。
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bcl-2是B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)基因的缩写形式,是最早在人类细胞中发现的凋亡调控癌基因。Bax是在人前白细胞基因文库中发现的一种凋亡相关基因。研究表明,Bcl-2的抗凋亡作用及Bax的促凋亡作用是通过二聚体的形式来实现的,两者在组织细胞中的表达量与细胞凋亡的调控紧密相关[1,2]。正常牙髓和炎症牙髓中存在细胞调亡[3],那么Bcl-2和Bax在其中有什么作用,本文就此作一报道。
1.1 动物模型的制备
参照余擎报道[4],选用LPS法的模型。
1.2 免疫组织化学染色
参照德国宝灵曼公司SP免疫组化试剂盒的方法,脱蜡至水后行微波抗原修复,用30ml/L H2O2消除内源性过氧化物酶的活性,100ml/L正常山羊血清(多抗)封闭37℃20min,倾去血清,分别滴加1:50的Bcl-2和Bax多抗工作液,4℃过夜。次日复温1h,滴加1:100的生物素标记二抗37℃30min,再滴加1:100的辣根酶标记链霉卵白素37℃30min,最后DAB显色15min,苏木精复染,脱水透明,中性树胶封片。(所用试剂均购自北京中山生物技术有限公司,各步骤间均用0.01mol/L的PBS振洗,阴性对照用PBS代替一抗。)
2 结果
正常牙髓中Bcl-2和Bax均有表达,两者均定位于细胞的胞浆,Bcl-2在部分胞膜上也有表达,表现为棕黄色着色。Bcl-2在成牙本质细胞层表达阳性,在牙髓中央区域弱阳性表达(图1); Bax在成牙本质细胞层表达强阳性,在牙髓中央区域呈阳性表达(图2)。从阳性染色的强度来看,两者在牙髓中央的表达弱于牙髓外周,尤其是成牙本质细胞层,而Bcl-2的表达在相应部位又弱于Bax。
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