摘 要：本文主要通过对幽门杆菌的流行病学研究，结合文献发现幽门螺旋杆菌可能通过口腔进行传播，同时口腔中幽门杆菌也是胃病反复发作的可能原因，所以对口腔中幽门杆菌进行检测，试图寻找到简单方便的幽门杆菌检测方法，是非常有必要的。经过临床实验发现，口腔中幽门杆菌确实可以检测。
　　关键词：幽门螺旋杆菌；口腔检测
　　幽门螺旋杆菌(Helicobacter phylori ,Hp) ,是一种Gram 阴性螺旋形细菌。1983 年由澳大利亚学者Marshall 和Warren 首先从慢性胃炎患者胃窦粘膜活检组织中分离成功[1]。目前已经基本确定Hp 是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病原菌,WHO 将其定为Ⅰ类致癌原。目前认为与人的胃炎、胃溃疡发病关系密切,对于Hp 的传播途径,比较多学者认为是通过消化道进行传播,口腔是幽门杆菌在人体内除胃部外又一个可能定居场所,本文通过对口腔Hp 研究,提出通过口腔牙菌斑快速检验Hp 可能性,为研发新型快速检验试剂提供理论指导，同时有助于幽门杆菌传播因素和口腔幽门杆菌防治研究。
　　1. 幽门螺旋杆菌流行病学特性
　　Hp 存在螺旋状体和圆球体二种形态,螺旋体的Hp 研究较多，对其特性较清楚。Hp 在不利环境下如暴露于抗生素、营养缺乏及延长培养时间等情况下转变为圆球体[2]。圆球体性质至今尚不清楚。很多学者认为圆球体是一种休眠形式,在一定情况下可以转变为螺旋状体而致病[3],因而认为圆球体在Hp 的传播过程中可能起重要作用,并可能在抗生素治疗Hp 感染复发过程中起一定作用。
　　Hp 在全世界人群中的慢性感染率达50%以上,在发展中国家,成年人Hp 感染率更是高达80 % 以上。
　　很多研究结果提示了Hp 经口—口传播可能存在。另外,Hp 在口腔中是暂时的居留还是长期的定植目前还不清楚。有研究发现从唾液、牙龈黏膜、咽部等处并非Hp 的永久居留地。牙斑、唾液中Hp 的存在是可能是暂时的，同时有学者认为胃病反复发作很可能和口腔中Hp 有关，所以对于口腔中幽门杆菌进行时事监控是必要的，但是现有检测手段大多没有针对口腔进行检测，而且操作复杂，耗时长。
　　2. 幽门螺旋杆菌
　　现有检测手段现有检测手段大致可以分为侵入式检测和非侵入式检测。
　　取胃活检组织直接涂片染色观察，是比较经典的检测方法,直观而且准确性较高。同时比较成熟的方法还有，活检粘膜尿素酶试验法，该法操作方便，快速，敏感性高，基于尿素酶能分解尿素使pH 升高，用pH 指示剂观察颜色的变化。上述方法都需要取胃粘膜组织或者血液具有一定创伤性，由于其检测的准确性较高而且价格相当便宜，此类检测方法在医院临床检验较普遍采用。同时为了适应快速无痛苦检测的市场需要，出现相应的无创伤性非侵入式检测方法，C13 或C14 呼气法，该法基于尿素很可能是Hp 生长因素之一，在胃粘膜上皮细胞结合处有很高浓度尿素存在，Hp 分解尿素为CO2 [4]。据述上述原理，患者口服C13 或C14 标记的药丸，产生的具有放射性的CO2 可以被微量气体感受器检测到。此法安全可靠快速不需要胃组织活检，C13 或C14 系天然放射性同位素，具有一定致癌性，导致呼气法无法应用与孕妇以及儿童，同时此类副作用具有潜在的致病性。聚合酶链反应（polymerase chainreaction，PCR）技术，为近年来新开发的一种分子生物学方面的最新试验，技术简单快速、可靠、敏感性高、特异性强。而且能准确地评估治疗前后HP 菌株属型以及是否根除。另外对胃粘膜以外的HP，如胃液、口腔、粪便中常规法不易检出的HP 菌株也能检出[5]。其次PCR 还可用于人群普查，观察HP 感染并确定其来源和途径。PCR 技术的广泛应用，对HP流行病学、传染病学及遗传病学的研究方面起到重要作用。由于医院的自身管理体系，对于PCR 系统的耗材难以快速满足，所以此类技术在医院较不成熟。
　　目前医院临床上用的检测方法大多具有但是耗时长，成本高，对病人造成的痛苦以及副作用，不利于推广和快速检测。
　　3. 幽门螺旋杆菌口腔检测
　　尽管口腔中的确存在Hp[6]，但迄今为止仍然没有一个快速检测口腔Hp 的方法，口腔检测在很大程度上依赖于既贵且慢的PCR 技术。
　　Hp 含有丰富的尿素酶，可以使试纸（试纸为用珠海市克迪科技开发有限公司的幽门螺旋杆菌胃粘膜检验试纸）中的尿素分解成氨，并使酚红指示剂变红色，如果没有Hp，试纸变色程度小。红色越深，表明Hp 浓度越大。
　　口腔的磨牙下牙龈的菌斑的Hp 密度最高[7,8]。所以在实验中主要取该区域的菌斑进行实验。刮取牙菌斑的方法参照文献[9]：棉卷隔湿后用消毒刮治器（注意杜绝外部细菌干扰）刮取四个磨牙颊侧近中点（第一磨牙缺失者取第二磨牙）的龈下菌斑，将取物的三分之一放在试纸中心，打散，压紧；其余密封待用。在试纸压紧90 秒后（精确计时）立刻揭开用定色剂定色，并用扫描仪进行扫描，扫描图象用Photoshop 软件进行变色区域的平均红色度测量，记录数据。另三分之一样品则密封后按照文献[10]进行PCR 扩增，确定样品中是否具有Hp。剩余三分之一的样本进行常规HE 染色，涂片寻找HP。最后将三种方法综合，以PCR 作为标准，最终按照红色度建立一个分布，并与PCR 与HE 染色结果结合，综合出一条区分线，高于该色度，则证明有Hp 存在，低于则没有。并且该区分度结果与PCR 结果没有显着性差异。根据色度区分线数据，我们可以直接将其颜色化，并印刷在试纸旁边作为参照（如现在通用的Hp 检测胃镜试纸）。口腔中Hp 与胃中Hp 存在着一定的关系，可根据口腔Hp 报告辅助判断胃中Hp 情况，并对胃病诊断提供帮助。
　　对广州军区广州总医院胃镜室进行了试验性抽样，按照上述方法共抽取30 例牙菌斑样本,首先通过PCR 确定抽样对象口腔中是否具有幽门杆菌,人为分成正常组和携带组两类进行实验发现,携带组试纸均变为深红色，均深于试纸的阳性对照颜色。正常组试纸颜色虽然变红，但浅于试纸的阳性对照颜色。
　　通过对样本试纸进行数码摄影，并用Photoshop 进行初步色度统计，记录正常组和携带组的平均色度以及胃黏膜检验试制阳性标准色度。
　　正常人与有Hp 携带的病人的口腔提取样本色度比较存在较大区别。对红色度进行比较，可以发现携带组的平均色度都会比阳性标准要高，而且色度高低和幽门杆菌数量成一定正相关关系。正常组的平均色度都较接近且和试纸标准阳性临界值相差不大。可能是口腔中的其他细菌造成的检测红色度升高现象。对于绿色度和黑色度的研究发现，正常组和携带组的色度相关性不是很明显，所以通过分析试纸变色后红色色度的情况可以较快速判断口腔中是否存在幽门杆菌，但是对于阳性红色色度标准可能要适当提高。
　　4. 讨论
　　通过前期研究发现通过口腔进行快速检验是可能,但是还是存在一定的问题:对样本进行数码转化的相机因受光线亮度角度等影响会对检验造成一定误差;口腔中Hp 分布异常不均匀，如何取避免杂菌污染,现有检验试纸适用于胃镜活检标本，不适用于口腔；可能出现的假阳性或假阴性结果;口腔中Hp 种群数目较少,怎么样放大检验，确定阳性临界红色色度等。
　　为减小这些影响因素,可以利用高分辨率的扫描仪取代有人为因素影响的数码相机，对变色区域进行平均色度计算。同时扩大样本采集数量，反复进行试验，建立细菌浓度梯度，确立临界阳性标准。所以研发专业的口腔幽门杆菌检测试纸是完全有可能的，不但能提高临床诊断的效率，免除医疗器械的消毒问题与病人交叉感染的风险，并且使得个人进行快速方便的自我检查成为可能，从而为广大的患者提供更方便的医疗服务。

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　　参考文献
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　　[2] 郑鹏远,唐芙爱等. 幽门螺杆菌二种形态的研究[J].中华消化杂志,1999, 19(4).
　　[3]邓朝晖，许春娣，陈舜年，奚容平.圆球形幽门螺杆菌生物学性状的研究[J].上海医学,2003 ,26(6)
　　[4]曾成,杨厚麟,吴锦燕,吴天秀. C14尿素呼气试验检测幽门螺旋杆菌临床应用价值的研究[J].Sichuan MedicalJournal,2006, 27(18)
　　[5]徐乐焱，姜国辉.PCR法检测研究HP传染途径[J].国外医学·核医学分册,1998,22(4)
　　[6]A damson I,E dlund C, Nord CE. Microbial ecology and treatment of Helicobacter pylori from dental playue.Rev Argent Microbiol, 1998,30(2):93-95
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　　[8]胡文杰，曹采方，孟焕新等.牙周炎及胃病患者的幽门螺旋杆菌[J].中华口腔医学杂志，1999，34(1):49.
　　[9]侯海玲、孟焕新、胡伏莲、成虹、胡文杰.不同方法检测牙菌斑中幽门螺旋杆菌的比较[J].现代口腔医学杂志，2004，18(3)，242-245.
　　[10]梁景平，李明宇，刘爱国等，口腔唾液中幽门螺旋杆菌的检测[J].广东牙病防治，1998， 6(1)，17-18.