汪竹平　王铎　高静　张武

摘要　目的:对测量甲硝唑根管消毒控释系统药物释放度的方法进行评价。方法:作体外释放实验、离体牙根周释药实验及自行设计的体内释药实验,求1、3、7、10天的甲硝唑释放度,进行统计学分析。结果:体外与离体牙、体内实验的累积释药百分率在不同的时间均有极明显显著性差异(P<0.01);离体牙与体内实验的累积释药百分率间无显著性差异(P>0.05)。结论:利用离体牙,将释放介质生理盐水控制在37℃,pH7.4,测定甲硝唑释放度的方法更接近于体内情况,是一种测定根管消毒控释系统药物释放度的有效方法。
关键词　根管　药物控释系统　释放度

Evaluation of Methods of Drug Release Rate in Root Canal Disinfection
Controlled-release Delivery System Containing Metronidazole

Wang Zhuping, Wang Duo, Gao Jing, et al
Department of Stomatology, Shangdong Medical University

　　Abstract　Objective: To measure the release rate of drug in controlled-release delivery system containing metronidazole. Methods: Drug release tests in vitro, in vivo and through the roots of extracted teeth were performed. The release rate of metronidazole was calculated after 1 day, 3 days, 7 days and 10 days, and the results were statistically analyzed. Results: Significante difference was observed among the total drug release rate in vitro, in vivo and through the roots of extracted teeth (P<0.01). There was no statistically significant difference between the release test in vivo and through the roots of extracted teeth in vitro (P>0.05). Conclusion: The method of using extracted teeth and the controlled release medium at 37℃, pH7.4 was close to the situation in vivo, and it was an effective method to measure the drug release rate of the root canal disinfection controlled-release delivery system.
　　Key words:　root　　drug controlled-release delivery system　　release rate

　　根管消毒控释系统是将制剂置于根管,药物直接作用于靶器官(根管及根周组织)的一种制剂方式。药物的溶出及扩散依赖于牙本质小管及根尖孔与组织液及渗出液的沟通,其作用环境具有一定的特殊性。通常采用的体外释放度测定方法能否较好地反映根管消毒控释系统的体内释药情况,及采用何种测定方法将更接近于体内情况是一个值得探讨的问题。作者利用渗透泵原理,采用膜控新技术,以牙胶尖为载体,研制了一种根管消毒控释系统,命名为甲硝唑控释牙胶尖(controlled-release dili-very gutta-percha point containing metronidazole,CRDGM)。本文利用CRDGM对测定甲硝唑释放度的方法进行了探讨。

1　材料和方法

1.1　材料和设备
　　紫外分光光度计(U-2000型,日立公司生产),超级恒温水浴箱(501型,上海实验仪器厂生产),甲硝唑(分析纯,上海第十八制药厂生产),CRDGM:由山东医科大学口腔系研制,每支含甲硝唑2013 μg,离体牙8颗:为发育成熟的健康单根管牙,拔除后立即于冠根交界处冠方2 mm处截开,保留根部,并作常规根管预备,贮存于4℃生理盐水中,时间不超过1周。
1.2　甲硝唑释放度实验
1.2.1　标准曲线绘制　以0.1 mol/L HCl为溶媒并以其作对照,制备甲硝唑标准溶液后,在277 nm处测吸光度。以浓度C对吸光度A作线性回归分析,得回归方程为C=25.4859 A-0.3314, r=0.9999。
1.2.2　体外释放实验　取100 ml生理盐水放入容量瓶中置恒温水浴箱预热至37℃,作为释放介质。内放6支CRDGM,分别于1、3、7、10天取样1.0 ml,并补加等量释放介质,样品以0.1 mol/L HCl稀释后,在277 nm处测量吸光度,求其平均值,根据回归方程求得甲硝唑浓度,换算出百分率及相应累积释药百分率。
1.2.3　离体牙根周释放实验　离体牙根周释放实验之前先进行干扰测定。
　　干扰测定　取离体牙1颗拭干根管后内置不含药物的空白控释剂1支,丁氧膏密封根管口,置入盛有3 ml释放介质的离心管中,12小时后取出空白控释剂放入研钵中研破,同释放介质一起移入容量瓶内,以0.1 mol/L HCl稀释,并以它为对照取样在200～400 nm扫描,与甲硝唑标准溶液的扫描曲线对比,结果该方法对甲硝唑吸光度的测定无干扰。
　　离体牙根周释放实验　取离体牙6颗,根管内各置1支CRDGM,丁氧膏密封根管口,放入3 ml释放介质中,于1、3、7、10天定时取样,另取1颗牙内置1支空白控释剂为对照,如上法求得平均甲硝唑浓度,计算累积释药百分率。
1.2.4　体内释放实验　选择临床上慢性根尖周炎单根管患牙24颗,开髓、拔髓,冲洗并拭干后置CRDGM于根管内,以丁氧膏暂封。将牙齿随机分为1、3、7、10天复诊组,各6颗牙,复诊时取出CRDGM,如上述实验方法求得甲硝唑含量,取6颗牙齿的平均值,记作,则体内甲硝唑释放量为x-,计算累积释药百分率。

2　结　　果

　　体外实验与离体牙、体内实验的累积释药百分率在1、3、7、10天时均具有统计学差异(P<0.01);而离体牙与体内实验的累积释药百分率间无统计学差异(P>0.05)。CRDGM在离体牙和体内的释放量及释放速率均明显低于在体外的释放(表1)。

表1　10天内体外、离体牙和体内累积释药百分率(%)

　　药物释放度是评价控释制剂性能的重要指标之一。体外实验方法简单易行、可重复性好,但能否较真实地反映体内释药情况是一值得探讨的问题。对根管消毒控释系统一般均采用将控释装置放于37℃、pH7.4生理盐水的释放介质中来测定药物释放度的体外实验方法。但牙体是一特殊环境,牙齿的根管由牙本质包绕,根管消毒控释系统置入根管后,其药物的溶出和扩散有赖于牙本质小管和根尖孔与组织液及渗出液的沟通,因此这种体外实验方法所设计的测试环境与体内应用情况有较大差异。作为根管消毒剂要求具有强的渗透性,药物能渗透到牙本质小管深层、侧支根管及根尖周围组织。药物在根管内的扩散与药物分子的大小及重量亦有一定关系,因此这种体外实验方法也不能真实地反映药物在根管内的渗透情况。
　　国内凌均等^［1］为探索新型药物控释根充尖用于牙髓尖周病治疗的可行性,作了离体牙根周释放实验。作者认为可用这种方法来评价根管消毒控释系统药物的释放度,因为它模拟了牙体环境,也符合根管消毒剂要有强的渗透性的要求。有研究表明根部牙本质结构与冠部牙本质相似,对于根管内的药物具有扩散作用^［2,3］。进一步的研究还表明,药物扩散的途径是通过牙本质小管和根尖孔,而最大的扩散途径是通过根部牙本质小管^［4］。由于不同性别的牙齿根部牙本质小管的数目不随着年龄的增长而发生变化,因此对于牙根发育成熟的牙齿,年龄和性别不影响根管内药物通过牙本质小管和根尖孔的渗透性^［5］。牙本质小管作为扩散通道还具有时间的相对稳定性,牙齿在拔除后3～4周对根部牙本质的渗透性没有影响^［6］。因此作者在作离体牙根周释放实验时选择牙根发育完成的健康单根管牙,拔除后立即截去牙冠,保留根部作根管预备,贮存于4℃、pH7.4生理盐水中,贮存时间加实验时间不超过4周,将CRDGM置入离体牙根管内,密封根管口放入释放介质中来测定CRDGM中甲硝唑的释放度。
　　为评价上述两种药物释放度的测量方法,作者设计了体内实验。因在体内不能直接测定其药物释放量,故采用了逆推法,即测定取出的CRDGM尚剩余的药量来间接获得其释放量的方法。结果表明CRDGM在离体牙根周的释放与体内相近,具有简单易行、可重复性好的优点,是一种测定根管消毒控释系统药物释放度的有效方法。

作者单位:山东医科大学口腔系　250012

参考文献

　1　凌均,樊明文,魏国贤,等.新型药物控释根充尖用于牙髓尖周病治疗的可行性研究.牙体牙髓牙周病学杂志,1995, 5(4):195～197
　2　Weslcy DJ, Marshall FJ, Rosen S. The quantitation of formocresol as a root canal medicament. Oral Surg, 1970, 29:603～612
　3　Harrison JW, Madonia JV.The toxicity of parachlorophe-nol. Oral Surg, 1971,32:90～99
　4　Abbott PV, Hume WR, Heithersay GS. Effects of combining Ledermix and calcium hydroxide pastes on the diffusion of corticosteroid and tetracycline through human tooth roots in vitro. Endod Dent Traumatol, 1989, 5:188～192
　5　Abbott PV, Heithersay GS, Hume WR. Release and diffusion through human tooth roots in vitro of corticosteroid and tetracycline trace molecules from Ledermix paste. Endod Dent Traumatol, 1988,4:55～62
　6　Outhwaite WC, Livingston MJ, Pashley DH. Effects of changes in surface area, thickness, temperature and postextraction time on human dentin permeability. Arch Oral Biol, 1976, 21:599～603